江西外泌體iTRAQ

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體，當使用標準液（已知外泌體的量）創(chuàng )建標準曲線(xiàn)時(shí)，甚至可以進(jìn)行定量。但是，此方法需要通過(guò)超速離心或超濾對樣品進(jìn)行預處理。同樣，流場(chǎng)-流分離與紫外線(xiàn)分析儀和光散射檢測器相結合已被用于分析外泌體的大小和純度。外泌體屬于胞外囊泡類(lèi)，除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。外泌體的提取分離方法：PEG-base沉淀法。江西外泌體iTRAQ

外泌體的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成可以影響它們的藥代動(dòng)力學(xué)特性，它們的天然成分可能在提高生物利用度和減少不良反應方面發(fā)揮作用。除了它們的診療潛力，外泌體也有幫助疾病診斷的潛力。它們已經(jīng)在所有的生物液體中被報道，并且通過(guò)生物液體取樣(液體活組織檢查)可以比較容易地獲得外泌體的復雜貨物的組成?；谕饷隗w的液體活檢在病癥和其他疾病的診斷和確定預后方面具有潛在的應用價(jià)值。疾病的進(jìn)展和對診療的反應也可以通過(guò)外泌體的多組分分析來(lái)確定的。鼻腔灌洗液外泌體質(zhì)譜細胞分泌到細胞外環(huán)境中分別稱(chēng)為外泌體和微泡的細胞外膜泡。

外泌體的組成較為復雜，其內含有多種生物大分子，如：核酸（雙鏈DNA和各種RNA亞型）、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。這些分子被外泌體攜帶進(jìn)入血液循環(huán)，而后被靶細胞吸收，從而調節靶細胞基因表達和細胞功能。此外，外泌體相關(guān)的miRNA作為短單鏈和非編碼RNA分子，調節致病基因或抑病基因的表達，參與細胞分化、細胞凋亡及細胞信號的傳導。有研究表明，外泌體能影響種瘤微環(huán)境的形成、增強種瘤細胞的侵襲和轉移能力、介導種瘤免疫壓制及參與種瘤放化療抵抗進(jìn)而促進(jìn)種瘤的發(fā)展。

除了siRNA和miRNA，mRNA也可以作為“貨物”被外泌體運輸。研究表明，在移植了人肺中流的小鼠模型的血液和唾液中分離出來(lái)的外泌體含有中流細胞特異性的mRNA，而被愛(ài)潑斯坦-巴爾病毒(EBV)感ran的細胞分泌的外泌體中也含有EBV的潛伏期mRNA。因而，外泌體的這種運載mRNA的能力引起了中流研究者們的注意。近期，Saydam等率先報道了利用多泡體(含外泌體)負載mRNA/蛋白進(jìn)行中流zhiliao的研究。研究者們利用脂質(zhì)體2000或病毒載體對HEK-293細胞進(jìn)行轉染，使其分泌的多泡體含有mRNA/蛋白(CD-UPRTEGFP，其中CD:胞嘧啶脫氨酶;UPＲT:尿嘧啶磷酸核糖轉移酶;EGFP:增強型綠色熒光蛋白)。將此多泡體注射至小鼠的神經(jīng)鞘瘤處，并輔助注射5氟尿嘧啶(5-FC)，神經(jīng)鞘瘤的增長(cháng)被明顯抑制。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。

外泌體的來(lái)源與特征：外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體，通過(guò)細胞內吞泡膜向內凹陷形成，其大小均一，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類(lèi)型細胞主動(dòng)分泌釋放。外泌體內主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能、參與細胞生物學(xué)活動(dòng)等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細胞來(lái)源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生；骨髓間充質(zhì)干細胞來(lái)源外泌體攜帶的miR-196a可調節成骨細胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體顯示出了在診療各種疾?。ㄈ缧募〔『蜕窠?jīng)?。┓矫娴臐摿?。外泌體普遍存在于細胞培養上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等。江西外泌體iTRAQ

外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。江西外泌體iTRAQ

利用抗ai癥藥物進(jìn)行中流zhiliao是抑制中流的一個(gè)重要方法，不過(guò)目前抗ai癥藥物的運載存在著(zhù)種種挑戰，主要體現在以下幾點(diǎn):(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體清chu，體內循環(huán)的半衰期很短等。采用外泌體運輸抗ai癥藥物，可以提高藥物體系的水溶性，降低藥物對人體的毒性以及避免被網(wǎng)狀內皮系統捕捉從而延長(cháng)其循環(huán)時(shí)間。近期，兩種抗ai癥藥物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已經(jīng)成功被載入外泌體中，并對其抗中流作用進(jìn)行了研究。江西外泌體iTRAQ

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