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妊娠期間胎盤(pán)可釋放外泌體到全身循環(huán)系統，參與妊娠期間母胎界面的免疫調節、子宮螺旋動(dòng)脈重塑和胎盤(pán)屏障的形成等重要事件調控，在正常妊娠過(guò)程維持中發(fā)揮重要作用。而很多妊娠并發(fā)癥，如子癇前期等胎盤(pán)功能紊亂相關(guān)疾病的發(fā)生，很可能與胎盤(pán)來(lái)源外泌體異常密切相關(guān)。目前外泌體分離方法主要包括：多步差速離心、蔗糖密度梯度離心、試劑盒沉淀、免疫磁珠分選、色譜法、過(guò)濾離心等方法。其中，多步差速離心是制備外泌體的經(jīng)典方法，該方法是根據外泌體的沉降系數差速離心將其分離出來(lái)，然而妊娠期母血清中除含有胎盤(pán)組織釋放的外泌體，還包括許多其他種類(lèi)細胞釋放的外泌體，如樹(shù)突狀細胞、淋巴細胞等，且血清中可能還存在一些大小類(lèi)似的物質(zhì)混雜其中，這些因素都會(huì )影響胎盤(pán)來(lái)源外泌體的分離純化。有報導指出，外泌體內miRNA參與促進(jìn)血管新生、抗癥性和促進(jìn)膠原蛋白沉淀等一系列過(guò)程。腹水提取試劑盒公司

外泌體生物學(xué)功能：1、在心血管系統中，據報道，源自人胚胎干細胞（ESC）的間充質(zhì)干細胞（MSC）外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷；2、在免疫系統中，據報道趨化因子受體CCR5通過(guò)外泌體在細胞之間轉移是細胞人類(lèi)免疫缺陷病毒傳染的一種機制；3、在中樞的神經(jīng)系統中，外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動(dòng)，從而阻止神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機理；迄今為止，尚未完全發(fā)現調節外泌體-細胞結合的途徑。然而，比較明顯，其結合過(guò)程從外泌體識別受體細胞PM上的特定受體開(kāi)始。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎，它可能活躍受體并隨后導致相關(guān)信號通路的活躍，外泌體與PM融合或外泌體的內吞作用，從而導致蛋白質(zhì)和RNA直接釋放到受體細胞中。腦脊液提取試劑盒公司超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現在也被用來(lái)沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì )破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。2、試劑盒提?。航鼛啄陙?lái)，市場(chǎng)上已出現各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過(guò)特殊設計的過(guò)濾器過(guò)濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái)。

外泌體的提取分離方法：1、超速離心法（差速離心）：超離法是較常用的外泌體純化手段，采用低速離心、高速離心交替進(jìn)行，可分離到大小相近的囊泡顆粒。超離法因操作簡(jiǎn)單，獲得的囊泡數量較多而廣受歡迎，但過(guò)程比較費時(shí)，且回收率不穩定（可能與轉子類(lèi)型有關(guān)），純度也受到質(zhì)疑；此外，重復離心操作還有可能對囊泡造成損害，從而降低其質(zhì)量。2、密度梯度離心：在超速離心力作用下，使蔗糖溶液形成從低到高連續分布的密度階層，是一種區帶分離法。通過(guò)密度梯度離心，樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集。此法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣，耗時(shí)。不同類(lèi)別的外泌體囊泡有三個(gè)征：表面具涂層的膜泡、內含纖維的膜泡、電子致密囊泡。

免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。首先對樣品進(jìn)行處理將囊泡裂解并將蛋白質(zhì)變性，變性后，通過(guò)SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)，然后將其轉移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中?？贵w特異性識別膜表面上的抗原，然后將膜暴露于第二抗體中。通過(guò)二抗的熒光標簽或與二抗偶聯(lián)的辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶基團進(jìn)行檢測。常用的標記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復性會(huì )受到所用抗體質(zhì)量的限制。建立記錄各論文實(shí)驗條件的數據庫也可作為規避混亂的方法之一。外泌體臨床應用

各種細胞粘著(zhù)分子在外泌體膜表面表達，由其決定外泌體被運輸往哪一種細胞。腹水提取試劑盒公司

外泌體的提取、純化和鑒定：每一個(gè)外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學(xué)性質(zhì)所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過(guò)形態(tài)學(xué)（電子顯微鏡技術(shù)）、粒子大小以及標志蛋白等方式實(shí)現的。近來(lái)的研究發(fā)現外泌體在比較多生理病理上起著(zhù)重要的作用，如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長(cháng)與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體具有脂質(zhì)雙層膜結構，能比較好的保護其包被的物質(zhì)，且能靶向特定細胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統。腹水提取試劑盒公司

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