Leeming-Notman液體培養基基礎

培養基的種類(lèi)有哪些？鑒別培養基：利用細菌分解糖類(lèi)和蛋白質(zhì)的能力及其代謝產(chǎn)物的不同，在培養基中加入特定的作用底物和指示劑，觀(guān)察細菌生長(cháng)過(guò)程中分解底物所釋放的不同產(chǎn)物，通過(guò)指示劑的反應不同來(lái)鑒別細菌。例如糖發(fā)酵管、克氏雙糖鐵瓊脂（KIA）、伊紅-亞甲藍瓊脂和動(dòng)力-吲哚-尿素（MIU）培養基等。選擇培養基：在培養基中加入抑制劑，去抑制標本中的雜菌生長(cháng)，有助于所選擇的細菌種類(lèi)的生長(cháng)。例如培養腸道致病菌的SS瓊脂，其中的膽鹽能抑制革蘭陽(yáng)性菌，枸櫞酸鈉和煌綠能抑制大腸埃希菌，因而使致病的沙門(mén)菌、志賀菌容易分離到。培養基也有不同的形態(tài)，可以是液體、半固體或固體形式。Leeming-Notman液體培養基基礎

培養基

培養基按成分分類(lèi)有哪些？按用途分類(lèi)：根據用途不同，培養基可分為基礎培養基、營(yíng)養培養基、增菌培養基、選擇性培養基、鑒別培養基、厭氧菌培養基等?；A培養基(basic media) 大多數微生物共同需要的營(yíng)養基礎。某--微生物如有特殊需要，可在此基礎上添加某種成分即可，如蛋白胨水、肉湯培養基、營(yíng)養瓊脂等。1%蛋白胨水培養基便是一個(gè)較簡(jiǎn)單的基礎培養基，該基礎培養基本身可供一般細菌增菌培養和靛基質(zhì)試驗用，若再加入指示劑和糖類(lèi)，則配成糖發(fā)酵培養基，供糖發(fā)酵試驗用，成為鑒別培養基；若在1%蛋白胨水中增加氯化鈉用量并將pH提高到8.6左右，則變成堿性蛋白胨水，用于霍亂弧菌的增菌培養，成為專(zhuān)門(mén)用的增菌培養基。S培養基微生物的供能方式會(huì )影響它對營(yíng)養物質(zhì)的利用，因此不同微生物需要不同成分的培養基。

要獲得微生物純培養，必須避免雜菌污染，因此對所用器材及工作場(chǎng)所進(jìn)行消毒與滅菌。對培養基而言，更是要進(jìn)行嚴格的滅菌。對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養基用1.05kg/cm2，121.3℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過(guò)程中，長(cháng)時(shí)間高溫會(huì )使某些不耐熱物質(zhì)遭到破壞，如使糖類(lèi)物質(zhì)形成氨基糖、焦糖，因此含糖培養基常在0.56kg/cm2，112.6℃15-30分鐘進(jìn)行滅菌，某些對糖類(lèi)要求較高的培養基，可先將糖進(jìn)行過(guò)濾除菌或間歇滅菌，再與其他已滅菌的成分混合。

培養基的pH必須控制在一定的范圍內，以滿(mǎn)足不同類(lèi)型微生物的生長(cháng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物。各類(lèi)微生物生長(cháng)繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的較適pH條件各不相同，一般來(lái)講，細菌與放線(xiàn)菌適于在pH7-7.5范圍內生長(cháng)，酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范圍內生長(cháng)。值得注意的是，在微生物生長(cháng)繁殖和代謝過(guò)程中，由于營(yíng)養物質(zhì)被分解利用和代謝產(chǎn)物的形成與積累，會(huì )導致培養基pH發(fā)生變化，若不對培養基pH條件進(jìn)行控制，往往導致微生物生長(cháng)速度下降或（和）代謝產(chǎn)物產(chǎn)量下降。因此，為了維持培養基pH的相對恒定，通常在培養基中加入pH緩沖劑，常用的緩沖劑是一氫和二氫磷酸鹽（如KH2PO4和K2HPO4）組成的混合物。K2HPO4溶液呈堿性，KH2PO4溶液呈酸性，兩種物質(zhì)的等量混合溶液的pH為6.8。當培養基中酸性物質(zhì)積累導致H+濃度增加時(shí)，H+與弱堿性鹽結合形成弱酸性化合物，培養基pH不會(huì )過(guò)度降低；如果培養基中OH-濃度增加，OH-則與弱酸性鹽結合形成弱堿性化合物，培養基pH也不會(huì )過(guò)度升高。培養基是一種含有必需營(yíng)養物質(zhì)的生長(cháng)介質(zhì)，用于細胞、細菌的培養和繁殖。

血清的主要成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動(dòng)物的性別、年齡、生理條件和營(yíng)養條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(cháng)因子、無(wú)機物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細胞生長(cháng)或抑制生長(cháng)活性是達到生理平衡的。血清主要作用：提供基本營(yíng)養物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機物、脂類(lèi)物質(zhì)、核酸衍生物等，是細胞生長(cháng)必須的物質(zhì)。培養基是一種營(yíng)養物質(zhì)混合物，可以為細胞提供生長(cháng)所需的物質(zhì)。SCCRAM 肉湯

無(wú)機培養基則為化學(xué)合成培養基，其用途從分離細菌到研究微生物生理生化特性都普遍應用。Leeming-Notman液體培養基基礎

在培養基中加入 HEPES 有何好處?培養基中常用的緩沖體系是碳酸氫鹽，它可提供營(yíng)養，但卻在生理 pH 條件下會(huì )降低緩沖能力。而HEPES 是一種很強的緩沖劑，能使細胞培養基在 pH7.2-7.6 條件下緩沖能力增強。HEPES溶液：是一種弱酸，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，主要作用是防止培養基pH迅速變動(dòng)。在開(kāi)放式培養條件下，觀(guān)察細胞時(shí)培養基脫離了 5%CO2 的環(huán)境，CO2 氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時(shí)可以維持 pH7.0 左右。一般在進(jìn)行克隆化培養時(shí)要添加HEPES。神經(jīng)細胞原代培養的過(guò)程中能用到。Leeming-Notman液體培養基基礎

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